ChIP
发布日期:2022-03-16 17:41:37 浏览次数:
原理:染色质免疫沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)是研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法,通常用于转录因子结合位点或组蛋白特异性修饰位点的研究。基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白质结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
应用:
ChIP方法能研究DNA甲基化、染色质结构、组蛋白修饰和转录因子的协同结合,或者从预测的靶基因中确定直接的靶位点。ChIP技术和其它分子生物学技术结合(例如普通PCR,实时定量PCR,基因克隆,DNA微阵列或者更直接的高通量测序技术),已经被用于确定转录因子和DNA的相互作用或转录因子新的基因组靶位点。
最初,ChIP应用于哺乳动物、酵母、果蝇染色质的研究上;后来,被应用在相关转录因子和修饰后组蛋白位置等方面的研究方面。ChIP技术还能用于研究蛋白和蛋白之间的相互作用,如通过酵母双杂交和ChIP证实了DELLA蛋白与PIF3蛋白之间的相互作用。
随着ChIP技术的进一步完善,它必将会在基因表达调控研究中发挥越来越重要的作用。而由于ChIP实验涉及的步骤多,结果的重复性较低,因此研究人员对ChIP实验过程的每一步都应设计相应的对照,而且对结果的分析也需要有一定的经验。对刚刚开始使用ChIP技术的实验新手,选用成熟的商品化试剂盒和相关的技术服务可达到事半功倍的效果。